物理形态: 20mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C), 50mM NaCl and 5mM EDTA溶液
分子量: 35kDa
浓度:10unit/ul
储存条件:存储在4-10℃冰箱,禁止-20℃以下低温冷冻
保质期:12月在4℃
pH 范围: PH6.0–10.0 有活性, PH=8.6具有最佳活性
适用范围:特异性酶切糖蛋白的N端寡糖
溶液内酶解SOP:
1.在 50mM 碳酸氢铵(pH 7.8)溶液中加入20ug变性的糖蛋白,调整体积至 18µl.
2.加 2µl rPNGase F溶液
3.37°C条件下, 保温 1–2 小时酶切糖蛋白样品
纯度: 使用Maldi TOF检测杂质蛋白质峰强度,rPNGase F峰峰高比大于99.5%
活性: 40000unit/min/mg;单位定义:rPNGase F蛋苷酶每分钟酶切1.0 umole 变性的Ribonuclease B的量,SDS-PAGE分析定量。反应条件:37℃,PH=7.5
Maldi TOF质谱检测: 变性的RNase B 使用rPNGase F 糖苷酶在37°C酶切60min后,使用FA基质激光解析质谱分析,可见切糖后的重链蛋白 14.9kDa和轻链蛋白14.1kDa质谱峰,未见杂质蛋白信号,糖蛋白的糖切除完全。
LC-MS/MS 质谱分析: 变性的RNase B经过PNGase F去糖处理,蛋白又使用Trypsin酶切成肽段,质谱鉴定到理论肽段9条,覆盖率67%。
质谱级PNGase F 糖苷酶特异性水解复杂的糖蛋白的寡糖和高甘露糖链接的天冬酰胺,酶切掉天冬氨酸脱氨基的天冬酰胺,保留低聚糖蛋白完好无损。但是不会去除低聚糖含有α(1→3)核心岩藻糖。