1. iTRAQ标记定量原理
iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation,同位素标记相对与绝对定量技术)技术是由ABI公司开发,其标签试剂可与氨基(包括氨基酸N端及赖氨酸侧链氨基)反应实现连接
在一级质谱中,不同来源的相同肽段被连接上总质量相同的完整iTRAQ标签试剂,具有相同质荷比,表现为一个峰
在二级质谱中,iTRAQ标签试剂在不同基团连接处发生断裂,试剂中报告基团表现信号(平衡基团发生中性丢失),根据不同报告基团信号峰强弱进行肽段定量并根据肽段二级质谱信息实现肽段定性,并最终回溯到蛋白水平
通量高:可一次实现最多8次样品的分离分析
重复性好且定量准确:所有样品的分离鉴定条件完全一致,保证了实验重复性,同时增强定量的准确性
分辨率高:可与最高分辨率的LC-MSMS技术结合,实现对低丰度蛋白的定量定性
数据丰富:可以获得检测到的所有蛋白的定性和定量信息
自动化程度高:以高分辨率液质联用为基础,自动化操作,分析速度快
包含iTRAQ® 试剂113、114、115、116、117、118、119及121,以及SDS变性剂、TCEP还原剂、MMTS半胱氨酸封闭试剂、TEAB缓冲液和异丙醇等,可用于最初的实验方案开发。
该试剂盒包含与Sciex iChemistry® 货号4390811相同的试剂。